使用生物素-亲和素系统的注意事项

1. 亲和素(avidin, AV)还是链霉亲和素(streptavidin, SA)?

虽然亲和素(avidin,AV)与链霉亲和素(streptavidin,SA)对在某些应用中，亲和素的结合具有很高的亲和力(avidin,AV)主要问题是它的非特异性组合，这是由于亲和素造成的(avidin,AV)糖链和高等电点的结构(pI)。因此，使用链霉亲和素(streptavidin,SA)它可以显著防止这种非特异性，或者使用相同的生物素来保留它(Biotin)结合脱糖化亲和素的性质(avidin,AV)这种非特异性也可以预防。

2.使用链霉亲和素(streptavidin,SA)-生物素(Biotin)作为多功能检测系统.

链霉亲和素系统生物素(Biotin-Streptavidin-System)在将抗体共轭连接到生物素的帮助下(Biotin)使用亲和素(avidin,AV)或链霉亲和素(streptavidin,SA)其检测方法几乎可以应用于任何免疫测定。它可以与各种廉价、高质量的商业荧光染料或酶相连。这使得生物素化抗体具有信号放大和灵敏度增加的优点，但同时也需要优化抗体和共轭连接溶剂。

3.使用生物素化抗体时，选择合适的缓冲系统.

强烈建议在封闭缓冲液等溶液中避免使用胎牛血清，以防止高背景和低信噪比(fetalbovineserum,FBS)和生物素(Biotin)。一个好的替代品是0.1%–2.0%牛血清蛋白蛋白(BSAfractionV)。在Westernblot中，脱脂奶粉或酪素(casein)由于残留的生物素，应限制在初始封闭步骤中(Biotin)会干扰检测。在这种情况下，抗体溶液应与硝酸纤维素膜和PVDF膜兼容，TBS-吐温(TBS-Tween)中制备。如果这个时候高背景还是个问题，0.2%的高纯度–6%酪素(casein)这个结果可以改善。

4.减少样品中残留生物素的干扰.

有时使用生物素-链霉亲和素系统(Biotin-Streptavidin-System)当时，Westernblot可能会检测到非特异性条带。这对于组织制备和细胞裂解物来说是一个特殊的事实，因为它们可能含有共价结合生物作为辅助因素的酶。在这种情况下，增加缓冲溶液的离子强度(~0.5MNaCl)和/或在与一抗共孵化前进行生物素(Biotin)封闭是有用的。在这种情况下，使用链霉亲和素(streptavidin,SA)琼脂糖微球去除生物素(Biotin)能显著提高生物素化酶的灵敏度。

5.用于蛋白质定量细胞表面的生物素化.

链霉亲和素系统生物素(Biotin-Streptavidin-System)在无创技术中成功地用于化学标记细胞表面蛋白，从而表达细胞表面和吞咽细胞的作用(endocytosis)以及一系列细胞质膜受体和抗原的直接和准确的定量检测。生物素与特异性受体和抗原相结合(Biotin)使用ELISA或Westernblot定量检测数量。该技术是一种快速、安全的放射性标记技术替代方法。

写到最后：

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