多肽纯化有哪些典型的问题（2）

5.哪些因素会影响到多肽纯度的测试结果

答：多肽纯度检验结果的关键要素有很多，涉及：流动相体系、色谱柱型号规格、柱温、波长及色谱仪的性能参数，各项有所不同都会导致最终结果有偏差。

6.反相色谱分离纯化后，如何去除产品中流动相产品中的TFA，乙腈等杂质？

答：冻干的方法基本上可以去掉大部分TFA和乙腈，只需要不高于准许范畴，这种方法是简便、高效的。对TFA的含量要求较高的部分药物肽冻干的办法通常不能完全满足要求，必须进行专用的转盐或脱盐。

7.多肽通常都有哪些盐的形式？根据哪种方法转盐或脱盐？

答：大部分多肽基本都是在TFA体系下分离纯化的，因此多肽以TFA盐的形式zui多，另一方面药物肽通常有醋酸盐及盐酸盐的形式，少部分药物肽会出现一些特殊的盐形式。转盐方式多数为离子交换法和HPLC法，而脱盐可以使用透析袋和超滤膜。

8.TFA在缓冲液中是否只发挥调控PH的功效？TFA的浓度越高基线漂移越严重，那是不是说TFA的浓度在缓冲液PH允许的范围内越低就越好？

答：

(1)TFA有着类似离子对的功效，通常浓度在0.05-0.1%，过高的浓度，会让溶液偏酸，长期使用会影响到柱子使用寿命。

(2)另外TFA遏制硅胶表面硅醇基，能够改善碱性样品的峰型。有时0.1%TFA分离不乐观。可以选择把浓度增加到0.2%。不过要注意使用后尽快清洗色谱柱。

写到最后:

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