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固拓生物-多肽合成为什么要去除TFA?
发表时间:2021-12-17在多肽固相合成过程中,三氟乙酸(TFA)经常被用来将多肽从固相树脂上切割下来。在反相HPLC纯化多肽的过程中,也会用到三氟乙酸或醋酸。但如果是用于临床前和临床研究中的多肽,残留的三氟乙酸或氟化物将会是有毒的和不受欢迎的。
公司合成的一般都是TFA盐形式。如果残留TFA会影响您的实验,固拓研究员通常建议转化为其他盐,如醋酸和盐酸盐形式。这些盐形式的多肽通常要比TFA盐费用多20%至30%,这是由于在转盐的过程中会损失部分多肽,而且需要更多的原材料。
TFA可能会带来很多问题。因此,我们可以去除TFA盐,从一开始就避免他们。
TFA是一种强酸。它可以质子化任何氨基。盐酸也是这样。在纯化多肽过程中的反相HPLC,有一种技术是阴离子交换。将多肽加载在柱子上,保持它在顶部,同时用足量的乙酸缓冲液洗涤,然后用乙酸水溶液/乙腈作梯度洗脱。冷冻干燥后,抗衡离子TFA被交换。该技术依赖于多肽的疏水性。一个亲水性高的多肽将需要一个合适的阴离子交换树脂。
使用一种特殊的反相C-18材料,提供了很好的分离法从而去除TFA。TFA、醋酸和氟化物的分离需用到由烷基季铵基团功能化的固定相。来自分析柱的洗脱液流经suppressor,降低了洗脱液的总背景电导,增强了分析物离子的电导。通过抑制电导,信噪比比非抑制电导改善了约50倍。
写到最后:
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